产品货号:
GS0108
中文名称:
磁珠法PCR产物纯化试剂盒(96孔)
英文名称:
Mag-BB 96 Well PCR Products Purification Kit
产品规格:
2×96T|10×96T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是在我司磁珠法PCR产物纯化试剂盒的基础上进行改进、一次可同时处理96个不同样品的试剂盒。该试剂盒利用磁性纳米分离技术从PCR反应产物及其他酶促反应物中,提取纯化高质量DNA,操作简单、快速,并能有效的除去蛋白质,dNTP,引物等杂质,适用于自动化核酸纯化平台,纯化后的DNA可以应用到各类下游分子生物学实验。
- 适用范围广,回收效率高,对于80bp~50kb之间的DNA片段回收效率在95%以上。
- 样品体积范围广,不需要离心。
- 操作简单快速,20~30min完成核酸纯化。
- 实现核酸纯化高通量化和自动化。
- 一次可同时处理96个不同样品。
组分 | 2×96T | 10×96T |
Buffer B2 | 40mL | 200mL |
QuMag Beads | 20mL | 100mL |
Deep Well Collection Plate | 2块 | 10块 |
96 Well Storage Plate | 2块 | 10块 |
TE Buffer(pH8.0) | 10mL | 50mL |
保存:室温,其中QuMag Beads置于2~8℃。
磁分离板和70%乙醇。
- 向Deep Well Collection Plate中反应液或酶促反应液加入2倍体积的Buffer B2和100μL QuMag Beads,吸打混匀,室温结合3min。
- 向Deep Well Collection Plate中反应液或酶促反应液加QuMag Beads之前,请将其充分混匀。
- 请务必将QuMag Beads加至液面以下,尽量将枪头上残留QuMag Beads吸打干净。
- 向Deep Well Collection Plate中反应液或酶促反应液加QuMag Beads之前,请将其充分混匀。
- 将Deep Well Collection Plate置于磁分离板上30 s,待QuMag Beads完全吸至孔壁上之后,吸弃上清,从磁分离板上取出Deep Well Collection Plate。
- 吸弃上清前,若孔口粘有少量QuMag Beads,请用上清液将其洗至孔内,以确保所有QuMag Beads吸附至孔壁上。
- 吸弃上清时,请勿吸入QuMag Beads,尽量吸净上清。
- 从磁分离板上取出Deep Well Collection Plate后,若有少量上清,请将Deep Well Collection Plate再次置于磁分离板上,再次吸取上清。
- 吸弃上清前,若孔口粘有少量QuMag Beads,请用上清液将其洗至孔内,以确保所有QuMag Beads吸附至孔壁上。
- 加入700μL 70%乙醇,吸打混匀,将Deep Well Collection Plate置于磁分离板上30s,待QuMag Beads完全吸至孔壁上之后,吸弃上清,然后从磁分离板上取出Deep Well Collection Plate。
- 吸弃上清前,若孔口粘有少量QuMag Beads,请用上清液将其洗至Deep Well Collection Plate内,以确保所有QuMag Beads吸至孔壁上。
- 吸弃上清时,请勿吸入QuMag Beads,尽量吸净上清。
- 吸弃上清前,若孔口粘有少量QuMag Beads,请用上清液将其洗至Deep Well Collection Plate内,以确保所有QuMag Beads吸至孔壁上。
- 重复步骤3一次,室温干燥15~20min或者55℃恒温箱中干燥5~7min至Deep Well Collection Plate内无液体残留。
- 干燥前,请尽量吸净Deep Well Collection Plate的液体。
- 干燥前,若出现液体挂壁现象,可将Deep Well Collection Plate短暂离心后,再将其置于磁分离板上,待所有QuMag Beads完全吸至孔壁后再吸净Deep Well Collection Plate内的液体。
- 干燥前,请尽量吸净Deep Well Collection Plate的液体。
- 加入与PCR反应液或者酶促反应液等体积的TE Buffer (pH8.0),充分悬浮QuMag Beads 5min,间或混匀。
- 请将96Well PCR Plate壁上所有QuMag Beads悬浮在TE Buffer中。
- 若浓缩PCR反应液,按照实验要求可以减少洗脱液的体积。
- 根据实验需要可以将TE Buffer用无菌的双蒸水(pH>7.5)代替。
- 请将96Well PCR Plate壁上所有QuMag Beads悬浮在TE Buffer中。
- 取出Deep Well Collection Plate并置于磁分离板上30s,待QuMag Beads完全吸至孔壁上后,小心吸取上清至96 Well Storage Plate,即获得纯化的产物。
- 吸取上清前,请确保QuMag Beads完全吸至孔壁,请勿吸入QuMag Beads,否则影响产物纯度。
- PCR产物回收效率较低或者未回收到目的片段
- PCR产物浓度太低。纯化前请通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物的浓度。
- 结合不充分。加入Buffer MP和QuMag Beads之后,请将其充分混匀,并使QuMag Beads处于完全悬浮状态。
- 操作过程中丢失QuMag Beads。结合及洗涤过程中可能有少量的QuMag Beads粘在96Well PCR Plate的孔口上,吸弃上清前请用少量的上清液清洗管口,使粘在管口的QuMag Beads也吸附在孔壁上。
- 洗脱液不合适。洗脱缓冲液的pH值对洗脱效率有影响,如果使用水进行洗脱,请确保其pH>7.5,pH值过低可能导致低洗脱效率。
- 洗脱过程操作不当。洗脱时请将孔壁上所有QuMag Beads悬浮在TE Buffer中。
- 洗脱过程忘记水浴。加入TE Buffer之后请65℃水浴5~10min,常温条件下QuMag Beads只能释放少量的DNA,65℃条件下QuMag Beads与DNA的作用力减弱,QuMag Beads释放出大量的DNA。
- PCR产物浓度太低。纯化前请通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物的浓度。
- 回收的PCR产物进行后续酶切或者连接效率低
- 乙醇有残留。请吸弃上清之后从磁分离板上取出Deep Well Collection Plate,放置1min之后再将Deep Well Collection Plate置于磁分离板上30 s,吸净孔底的液体。若出现残液挂壁现象,请短暂离心之后将Deep Well Collection Plate置于磁分离板上30 s,吸净孔内的液体。
- QuMag Beads洗涤不充分。向孔内中加入85%乙醇以后,请充分混匀,使QuMag Beads充分悬浮在85%乙醇中。
- QuMag Beads没有完全干燥。请将QuMag Beads完全干燥,保证无乙醇残留。
- 最后一步吸取上清时吸入QuMag Beads。请确保所有QuMag Beads吸至孔壁上,再吸取上清。如果不小心吸入QuMag Beads,请将上清液放回原孔,待QuMag Beads完全吸至孔壁之后重新吸取上清。
- 回收后的PCR产物在反复冻溶的情况下,会加速末端A和整个PCR产物的断裂,从而造成与T载体连接或直接酶切效率的下降。建议回收后立即进行酶切或连接实验。
- 选择合适的PCR产物和T载体的分子数比例,有助于提高连接效率。
- 请确保PCR最后72℃ 5~10min的延伸时间,这样才有足够的PCR产物在末段带有A附加碱基,保证较高的连接效率。
- 乙醇有残留。请吸弃上清之后从磁分离板上取出Deep Well Collection Plate,放置1min之后再将Deep Well Collection Plate置于磁分离板上30 s,吸净孔底的液体。若出现残液挂壁现象,请短暂离心之后将Deep Well Collection Plate置于磁分离板上30 s,吸净孔内的液体。
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